动脉粥样硬化是心血管疾病的主要发病因素，一旦斑块破裂并形成血栓的话，就可能直接导致心源性猝死[1]。
目前普遍认为，免疫炎症与动脉粥样硬化密切相关，它可以直接参与动脉粥样硬化的各个阶段[2]。虽然临床上已经在使用抗炎药物，但这些药物的疗效远没有达到预期。
因此，寻找新的抗炎靶点对于治疗动脉粥样硬化是迫在眉睫的事情。
近日，由牛津大学ClaudiaMonaco领衔的研究团队在心血管顶级期刊CirculationResearch发表重要研究成果，他们发现OX-2膜糖蛋白（CD）对动脉粥样硬化具有保护作用，这可能依赖于CD抑制单核细胞的生成和募集，进而抑制炎症、稳定斑块[3]。
这意味着CD可能是动脉粥样硬化的一个免疫检查点。
论文首页截图
心血管疾病一直是全世界人们的死亡病因之首[4]，严重威胁了人类健康，并好发于50岁以上人群，即使接受了良好的治疗，仍有50%以上的患者出现生活不能完全自理现象，给患者带来巨大的医疗负担。
动脉粥样硬化是心血管疾病中最常见的病因，目前在临床用药治疗中比较成熟的药物仅限于降低低密度脂蛋白和胆固醇的药物。
但是越来越多的研究发现动脉粥样硬化同样是一种免疫炎症反应，因此炎症也被认为是动脉粥样硬化的标志[5]。
针对动脉粥样硬化的抗炎治疗手段也相继问世，但它们的治疗效果在一定程度上不能满足现有的临床需求。
那么，如何抑制免疫炎症反应来稳定斑块，也成为治疗动脉粥样硬化面临的重要问题。
说到免疫炎症反应，就不得不提到免疫检查点，近年来它逐渐成为炎症研究的热点。
免疫检查点就是激活或抑制受体-配体对，来控制T细胞和抗原呈递细胞的激活，进而调节免疫反应。目前已经有研究报道，免疫检查点在动脉粥样硬化中发挥着重要作用[2]。
CD是一种膜糖蛋白，广泛表达在淋巴细胞，它可与CD抑制性受体（CDR）结合来抑制免疫反应，并且CDR仅表达在骨髓细胞[6]。
CD-CDR就是这样一个免疫检查点，它可抑制自身免疫性脑脊髓炎中的小胶质细胞活化，以及在肺部感染期间可以维持肺泡巨噬细胞的耐受性，并防止巨噬细胞扩张[7]。
由于巨噬细胞来源于单核细胞，于是研究人员们想知道：CD-CDR对单核细胞是否也有某种作用。
此外，CD也是冠心病患者的外周血中，基因表达变化最明显的前10个关键调控基因之一[8]，但是关于CD-CDR在动脉粥样硬化中的作用还不清楚。
由此，研究人员们猜想CD-CDR对动脉粥样硬化中的单核细胞可能会有影响。
接下来，跟随我一起看看研究人员们是如何开展相关研究的。
为了评估CD和CDR在动脉粥样硬化中的作用，他们对载脂蛋白E-/-（ApoE-/-）小鼠给予高脂饮食（建立动脉粥样硬化疾病模型的常见方法）喂养12周、20周和28周后，检测主动脉根部CD和CDR的表达，结果发现，在动脉粥样硬化过程中，随着时间的推移，CD（而不是CDR）的表达显著增加。
并且发现CD主要表达在内皮细胞和平滑肌细胞上，CDR则在单核细胞和巨噬细胞中表达显著增加。
接下来他们使用了CD敲除（Cd-/-ApoE-/-）小鼠进行动脉粥样硬化疾病造模，与Cd+/+ApoE-/-小鼠相比，Cd-/-ApoE-/-小鼠的主动脉根部病变大小明显增加。同时病变坏死核面积变大，平滑肌细胞阳性面积减少，以及病灶部位巨噬细胞含量明显增多。
由此可见，CD缺失可以促进动脉粥样硬化病变的发展和易损斑块的形态。
Cd+/+ApoE-/-和Cd-/-ApoE-/-小鼠主动脉根部的病变区域
随后他们又对动脉粥样硬化过程中的免疫细胞进行分群，发现在Cd-/-ApoE-/-小鼠主动脉中Ly6Chi单核细胞和CD4+T细胞显著增加。
为了阐明Cd-/-ApoE-/-小鼠病灶部位炎症细胞含量增加的分子机制，他们分析了小鼠主动脉炎症基因的表达。结果显示，Cd-/-ApoE-/-小鼠的主动脉中CD68和CCR2的表达显著增加。并且，CCR2及其配体CCL2／CCL7（趋化因子）也是动脉粥样硬化形成过程中单核细胞运输的关键因子[9]。
紧接着他们发现CD缺失促进了CCL2诱导的单核细胞迁移，以及Cd-/-ApoE-/-小鼠的肺泡中单核细胞的募集显著增加，并且IL-6（白介素）、CCR2、CCL7和CXCL10（趋化因子）表达升高。
CD缺失促进单核细胞迁移
而后，为了检测CD-CDR是否直接调控趋化因子的产生，他们评估了CDR激动剂在人动脉粥样硬化中的作用。他们分离了人颈动脉粥样硬化斑块的细胞，并获得混合细胞型单细胞悬液，然后使用CDR激动性抗体处理细胞。
结果显示，CDR激动性抗体可以显著地降低人动脉粥样硬化中体内自发产生的IL-6和CCL2水平。由此可以证明，CD-CDR的激活会减少动脉粥样硬化中趋化因子的产生。
接下来他们使用CDR激动性抗体处理单核细胞，发现处理后的单核细胞数量显著下调。并且激活CDR可以降低干扰素诱导的STAT1磷酸化。
由于Jak2是STAT1磷酸化的关键激酶，于是他们使用了Jak2抑制剂给予Cd-/-ApoE-/-小鼠口服治疗，结果显示，骨髓来源的巨噬细胞和Ly6Chi单核细胞数量减少,表明抑制STAT1磷酸化逆转了Cd-/-ApoE-/-小鼠单核细胞的增加和巨噬细胞的活化。
此外，CD可以在基质细胞或髓系细胞中表达，为了明确是否基质或造血细胞中CD对动脉粥样硬化病变也有影响，他们使用了骨髓嵌合体小鼠（骨髓系统细胞为异性状的嵌合体小鼠，多用于免疫、造血系统有关的实验）。
发现基质细胞中缺失CD可导致动脉粥样硬化病变大小显著增加，而虽然造血细胞中CD缺乏没有显著影响主动脉根部病变大小，但Ly6Chi单核细胞显著增加。这表明基质细胞和造血细胞来源的CD都可能参与调控主动脉单核-巨噬细胞的含量。
嵌合体小鼠主动脉根部的病变区域
最后，他们通过人群样本数据分析显示，单核细胞中CDR的水平与总病灶面积之间呈现显著的负相关性，并且单核细胞上的CDR表达与稳定斑块的表型相关。这增强了CR-CRR在动脉粥样硬化中的临床意义。
综上，CD通过抑制单核细胞的形成和募集，进而减少动脉粥样硬化过程中单核细胞和巨噬细胞的积累，最终控制炎症、稳定斑块和缓解动脉粥样硬化的进程。
这背后的机制可能是CD-CDR免疫检查点介导的细胞间相互作用，阻止了骨髓细胞中STAT1的激活。CD免疫检查点有望成为治疗动脉粥样硬化和心血管疾病的一个新靶点。
我们都知道，炎症是动脉粥样硬化发生的关键因素，而开发更有效的抗炎药物可能成为一种缓解动脉粥样硬化的更有力的手段。
这个研究发现，在动脉粥样硬化发生过程中，CD可通过与它的受体CDR结合来控制单核-巨噬细胞的过度激活和募集，进而促进斑块稳定，这可能依赖于STAT1的磷酸化受到抑制。
这提示了我们，CD是一种抑制性免疫检查点，它可能为精确靶向单核-巨噬细胞治疗提供了一种新的潜在的抗炎靶点，对临床应用具有重要意义。
参考资料：
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[2]KustersPJH,LutgensE,SeijkensTTP.Exploringimmunecheckpointsaspotentialtherapeutictargetsinatherosclerosis.CardiovascRes.;(3):-.doi:10./cvr/cvx
[3]KassiteridiC,ColeJE,GriseriT,etal.CDLimitsMonopoiesisandMonocyteRecruitmentinAtherosclerosis.CircRes.;doi:10.1/CIRCRESAHA..
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